华体会官网入口app:使用C-950双模式高效分离蛋清蛋白

  蛋白质在生物系统中起着至关重要的作用，参与生命所必需的各种代谢过程。由于它们的重要性，它们被大范围的应用于制药等行业，在这一些行业中，它们有助于药物开发（例如抗生素和生物制药），以及食品生产，在这一些行业中，它们作为营养补充剂的关键成分。鉴于它们在健康相关应用中的预期用途，在蛋白质提取过程中实现高纯度是至关重要的。

  这些蛋白质在纯化后会自发地重新折叠。反相色谱法可作为Flash法或高效液相色谱法进行。这两种技术经常被使用，但目的不同：Flash色谱法主要用作纯化前步骤，以足够的分辨率纯化大量样品，而高效液相色谱法的目标是在较低上载量的条件下获得最高的分辨率（纯度）

  色谱介质中较大的孔径允许更好地进入固定相，提高蛋白质分离的分辨率。固定相的颗粒大小也会影响蛋白质与表面的相互作用。较小的颗粒提供更多的相互作用位点，导致更明显的分离，而较大的颗粒限制了接触面积，降低了分辨率。

  蛋白质在色谱分离过程中的行为在很大程度上受其电荷的影响，这取决于溶剂的pH值。为了保持蛋白质的稳定性，通常在缓冲溶液中进行纯化，以保持其天然结构。

  有一个鸡蛋裂开了，蛋白和蛋黄分开了。蛋清在A洗脱液中稀释至1/3，在3000转/分的转速下离心15分钟。A洗脱液稀释后，蛋清中部分蛋白析出，离心后形成颗粒。回收上清液用于液样进样。

  先前的实验表明，使用PrepPure C18WP （300 Å）柱，10 μm作为固定相，能轻松实现最佳的蛋白分离。图1是样品的色谱图，使用PrepPure C18WP （300 Å）， 10 μm，在类似参考文献的梯度下（梯度1：30%-90%，超过10分钟）。与参考文献不同，根据洗脱顺序，只观察到以下峰：卵泡样蛋白、卵泡红蛋白、溶菌酶、卵泡转铁蛋白和卵泡白蛋白。这些差异可归因于用于样品制备的鸡蛋的质量和来源的差异。

  相同条件下的色谱图，使用C18非WP （100 Å） （PrepPure C18, 10 μm）研究孔径的影响。虽然紫外信号表明与C18WP相比，前两个峰的分辨率提高了，但较低的吸光度和ELSD信号表明没发生有效的分离。C18WP的大孔径（300 Å）使蛋白质能够穿透颗粒并有效地与固定相相互作用。相比之下，PrepPure C18 （100 Å）， 10 μm没办法实现分离，因为蛋白质只能与颗粒的外表面相互作用。这种有限的相互作用减少了吸附和解吸之间的平衡步骤的数量，进而影响了分离效率。

  相同的条件下（梯度3），使用Flash色谱柱：FlashPure Select C18 （100 Å）， 30 μm和EcoFlex C18 （100 Å）， 50 μm的色谱图。当颗粒尺寸大于10 μm时，分离效果不明显。表面相互作用的减少进一步限制了吸附和解吸之间的平衡步骤，使该梯度不足以有效分离。因此所有蛋白质以10%的梯度同时洗脱。此外，随着颗粒大小的增加，更多的蛋白质在10%时共洗脱，减少了之前观察到的30%的洗脱。

  蛋清含有多种大分子蛋白，分子量约为14 ~ 80 kDa。这些蛋白质的有效分离取决于它们与固定相相互作用的能力，这是利用具有大孔和小粒径的二氧化硅介质来增强的。研究表明，当与合适的C18WP柱配对时，Pure Excellence C-950系统能有效地分离蛋白质混合物。只有通过宽孔颗粒（300 Å）、小粒径颗粒（10 μm）和阶跃梯度的组合才能成功分离。对孔径和粒径影响的进一步研究证实，只有大孔径材料才能促进蛋白质与固定相的充分相互作用，以此来实现有效的分离。此外，大于10 μm的颗粒被证明是不合适的，因为它们不提供有效分解蛋白质成分的必要条件。

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